生物实验报告观察植物细胞的质壁分离与复原（12篇）

第1篇 生物实验报告观察植物细胞的质壁分离与复原

一、实验目的

1. 初步学会观察植物细胞质壁分离和复原的方法。

2. 理解植物细胞发生渗透作用的原理。

二、实验原理

当细胞液的浓度小于外界溶液的浓度时，细胞液中的水分就透过原生质层进入外界溶 液中，使细胞壁和原生质层都出现一定的收缩。由于原生质层比细胞壁的收缩性大，当细胞不断失水时，原生质层就会与细胞壁逐渐分离开，也就是分升了质壁分离当细胞液的浓度大于外界溶液的浓度时，外界溶液中的水分就透过原生质层进入细胞液中，整个原生质层就会慢慢地恢复成原来的状态，使植物细胞逐渐发生质壁分离复原。

三、材料用具

紫色洋葱鳞片叶、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、刀片、吸水纸、清水、0.3g/ml蔗糖溶液

四、实验过程（见书ｐ60）

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五、讨论

1．如果将洋葱表皮细胞浸润在与细胞液浓度相同的蔗糖溶液中，这些表皮细胞会出现什么现象？

2．当红细胞细胞膜两侧的溶液具有浓度差时，红细胞会不会发生质壁分离现象？为什么？

3．画一个细胞在正常状态下到经过0.3g/ml蔗糖溶液处理，再经过清水处理的细胞变化的一系列模式图。

第2篇 生物实验室述职报告模板

时间过地飞快，忙忙碌碌中又过了一学年，在这一学年里，我一向以一名优秀实验员的标准要求自己，认真学习，努力工作，用心思考，力求在工作、学习上有进步，在教师修养上有提高，争取做一名合格的实验员。

在思想上，热爱祖国，热爱____，坚决拥护党的领导及路线、方针、政策;提高认识，增强紧迫感、时代感、职责感，适应发展要求，强化“六个意识”：第一，强化自我充电意识;第二，强化科研意识;第三，强化信息网络意识;第四，强化合作意识;第五，强化创新意识;第六，强化服务意识。

在工作上，踏实进取、认真谨慎，尽职尽责，对自己负责、对单位负责、树立大局意识、服务意识、使命意识，努力把“全心全意为学校服务”的宗旨体此刻每个细节中;以改善工作作风、讲求工作方法、注重工作效率、提高工作质量为目标，用心努力，较好地完成了全年的各项工作任务。

本学期生物实验室的工作重点仍是为辅助生物理论教学的顺利进行，开展好实验教学。生物实验具备培养学生观察和动手潜力的功能，更有培养学生动脑、启迪思维、开发潜能的作用，现将本学期生物实验工作做如下总结：

一、随着学期工作的结束，实验室的维护与管理工作又将开始，为新学期理论教学工作的顺利开展做好准备，实验室的管理工作是一个不可缺的重要环节，个性是二线为教学服务的管理工作，是较零碎而不大起眼的工作。但是，在管理工作上，仍要将仪器进行科学规范管理。实验室的仪器较多，繁杂。规范的管理可使人看上去就要有一种既科学又舒适的感觉。因此在原有的管理上，除了将仪器进行分门别类分柜，分层放置，仪器贴有标签等外，按照管理和实验的性能，将仪器进一步规范化，这样一来教师使用方便，效率较高。

二、本学期期末仍要做好仪器防锈，防尘，防潮等工作，仪器使用以后防锈工作不可少的，个性是较精密的显微镜等仪器，每使用后，要认真清理和擦试镜头和有关活动的部件，然后装入箱内保存，定期进行检查，发现问题立即采取措施。让所保管的所有仪器几乎无锈、无尘和受潮现象。

三、认真做好仪器的维修工作。每一学期结束前，必须要将仪器进行全面清理和维修，为下学期做好充分准备工作。

四、辅助一线教师提高生物教学效果，优质服务是二线工作人员的职责，也是学校发展的基础。因此在实验管理工作中，除了要熟悉教材，还要掌握分组实验和演示实验与教师任课的大致进度和时间，做好实验的一切准备工作。

五、生物实验室的工作属二线管理工作，在工作中几乎不会有较大的教学成果，工作压力也不会有一线教师的那么大。但是，随着社会的发展，学校的工作也会随着发展和变化。因此在本学期完成任务的前提下，应充分利用余业时间学习专业知识和一些管理常识，不断丰富自己，争取早日像一线教师一样站在最前线努力工作或使自己的管理工作更具特色，为以后的学校的发展做出应有的贡献。

六、按时打扫实验室卫生，确保室内外的整洁。实验室的整洁能够让任课教师和学生的情绪舒坦，是任课教师上课更有效率，学生学习更有激情。

第3篇 生物实验报告观察植物细胞的有丝分裂

一、实验目的

1.观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期。

2.初步掌握制作洋葱根尖有丝分裂装片的技能。

3.初步掌握绘制生物图的方法。

二、实验原理

在植物体中，有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞，高等植物细胞有丝分裂的过

程，分为分裂间期和分裂期的前期、中期、后期、末期。可以用高倍显微镜观察植物细胞的

有丝分裂的过程，根据各个时期细胞内染色体（或染色质）的变化情况，识别该细胞处于有

丝分裂的哪个时期，细胞核内的染色体容易被碱性染料着色。

三、材料用具

洋葱根尖、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、培养皿、铅笔、质量分数为15%的盐酸、

体积分数为95%的酒精、质量分数为0.01g/ml的龙胆紫（或紫药水）

四、实验过程（见书ｐ39）

1．洋葱根尖的培养（提前3—4天）

2．解离：5min

3．漂洗: 10min

4．染色: 5min

5．制片

6．镜检

五、注意

1．解离充分是实验成功的必备条件。解离充分，组织才能分散，细胞也不会重叠。

2 ．漂洗时间一定要足够，否则细胞染不上色。

3 ．染色时，染液的浓度和染色时间必须掌握好。特别是染色不能过深，否则镜下一片紫色，无法观察。

六、讨论

1．制作好洋葱根尖有丝分裂装片的关键是什么？谈谈你自己的体会。

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2．在观察清楚有丝分裂各个时期的细胞以后，绘出洋葱根尖细胞有丝分裂的简图，并标明时期。

第4篇 观察洋葱表皮细胞的生物实验报告

观察洋葱表皮细胞的生物实验报告

一观察洋葱表皮细胞

实验目的：通过观察洋葱表皮细胞，说明植物体是由细胞组成的实验材料：：显微镜、洋葱、镊子、滴管、水、载玻片、针、盖玻片、吸水纸、纱布。实验步骤：

（一)制做临时装片。

（1）用纱布将载玻片、盖玻片擦干净。

（2）用液管在载玻片上滴一滴清水。

（3）用镊子在洋葱鳞片叶上撕下一小片表皮。

（4）将撕下的表皮放入载玻片上的水滴中，用针将其展开。

（5）用镊子夹住盖玻片，先将一边接触载玻片的水滴边经再慢慢把盖玻片放平，制成临时切片。

（4）在盖玻片的翼侧滴加稀碘液，用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使染液浸润标本的全部。

（二）安装临时装片：将临时切片放到显微镜上，调整显微镜与临时切片位置，直到可以观察到清晰的图像为止实验图像：

200倍800倍

实验结论：洋葱表皮是由无数细胞构成的，有明显的细胞核，细胞壁，细胞质出现。

二．观察人的口腔上皮细胞的实验教案

1、学习要求：

1.制作和观察人的口腔上皮细胞临时装片。2.认识人的口腔上皮细胞的基本结构。

2、材料用具：

生理盐水，稀碘液，消毒牙签，滴管，纱布，镊子，吸水纸，载玻片，盖玻片，显微镜。

3、实验方法和步骤：

1.用洁净的纱布将载玻片和盖玻片擦拭干。2.在载玻片中央滴一滴生理盐水。

3.用消毒牙签在口腔内侧壁轻刮几下放在生理盐水中。

4.用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，再将盖玻片缓缓放平盖在水滴。

5.在盖玻片的一侧滴加几滴稀碘液，用吸水纸在盖玻片的另一侧吸引，使碘液浸润标本的全部。

总结步骤：

擦-→滴-→取-→盖-→染-→吸五、绘制人的口腔上皮细胞

三．测定某种食物中的能量

实验目标一颗花生种子含有多少能量？

实验器材或药品 水

实验探究过程 现象

分析及结论

1、在锥形瓶中装30ml水

实验前水温：

2、把花生固定在解剖20℃、20℃、24℃

针上

试验后水温：

3、在酒精灯上点燃花73℃、78℃、68℃

4.2j生并尽快把花生放到锥

温差：×51×4.2=6300j

形瓶下面 53℃、58℃、44℃ 、待花生完全烧完后，平均值：51.666℃

一颗花生种子约含有6300j

实验结的能量论

四．探究馒头在口腔中的变化实验报告

一、问题的提出：取一块馒头放到口中咀嚼。口腔中的馒头要经过牙齿的咀嚼、舌的搅拌以及与唾液的混合。细细品尝这时的馒头，你能尝出一些甜味来。馒头变甜是否与牙齿的咀嚼、舌的搅拌以及唾液的分泌有关呢？如果有关，它们各起什么作用呢？馒头变甜是否是淀粉发生了变化？

二、作出假设馒头变甜与牙齿的咀嚼、舌的搅拌以及唾液的分泌都有关。馒头变甜是因为淀粉被唾液中的唾液淀粉酶分解成了带有甜味的`麦芽糖。在这个过程中，通过牙齿的咀嚼将馒头嚼碎，舌的搅拌使馒头碎屑与唾液充分混合。

三、制定计划（一）实验原理

馒头变甜应该是成分中糖类发生变化。馒头的主要成分是淀粉，因此本实验利用淀粉遇碘变蓝的特性，以及口腔中的温度为37℃的常识。控制变量唾液，以及模拟牙齿的咀嚼作用和舌的搅拌作用。三支试管，两个对照实验。一支试管作为实验组，另两支试管作为对照组。如果模拟牙齿的咀嚼功能、舌的搅拌功能并加入唾液，滴入碘液后，实验组的试管内没有变成蓝色，说明馒头中淀粉的变化与牙齿的咀嚼、舌的搅拌以及唾液的分泌都有关。如果变成蓝色，则说明淀粉没有被分解，馒头变甜与牙齿的咀嚼、舌的搅拌以及唾液的分泌没有关系。（二）实验变量的控制

两个对照实验。一个对照实验的实验变量是唾液，实验组内加入唾液2ml，对照组试管加入2ml清水。另一个对照实验的实验变量是馒头块的状态：实验组的馒头块用刀切碎，放入试管中并震荡试管，对照组的馒头块不做任何处理，直接整块放入试管中，并且不震荡试管。

（三）实验方案实验材料用具：馒头块（三小块等大）试管（三支）烧杯（三个）盛唾液的小烧杯滴管温度计石棉网三脚架碘液小刀小木板

1.取新鲜的馒头，切成大小相同的a、b、c三小块。将a块和b块分别用刀细细地切碎，拌匀（模拟牙齿的咀嚼和舌的搅拌），c块不做任何处理。

2.用凉开水将口漱净，口内含一块消毒棉絮。约1分钟之后，用

干净的镊子取出棉絮，将棉絮中的唾液挤压到小烧杯中。

3.取3支洁净的试管，分别编上（1）、（2）、（3）号，然后做如下处理：

将a馒头碎屑放入（1）号试管中，注入2ml唾液并震荡试管；将b馒头碎屑放入（2）号试管，注入2ml清水并震荡试管；将c馒头放入（3）号试管，不震荡。将三支试管一起放入37℃左右的温水中。4.5-10分钟后，取出这三支试管，各滴加2滴碘液，摇匀。然后，观察并记录各试管中的颜色变化。四：实施计划

按确定的探究计划进行实验，观察实验现象。可见，（1）号试管中没有变成蓝色；（2）号试管变成蓝色；（3）号试管中的馒头块部分变成蓝色。

五、分析实验结果，得出结论

分析实验现象，（1）号试管中滴入碘液后，没有变成蓝色，说明试管中已经没有淀粉，淀粉被唾液中的唾液淀粉酶分解成麦芽糖了，麦芽糖没有遇碘变蓝的特性，所以滴入碘液后不变蓝。（2）号试管中加入的是清水和馒头碎屑，水没有消化淀粉的作用，因此，滴入碘液后，馒头碎屑中淀粉遇碘变成蓝色。（3）号试管中只有部分变成蓝色，说明馒头与唾液的接触不充分，只有部分淀粉被分解。由此，得出结论：说明馒头变甜与牙齿的咀嚼、舌的搅拌以及唾液的分泌都有关系。因为上述活动模拟了消化与唾液的分泌以及牙齿的咀嚼、舌的搅拌，（1）号试管中的馒头接触到了足量的唾液，并被消化。

第5篇 初一学生物理实验报告

“浮力消失”了

做下面的小试验。

器材

找一个底面很平的容器，让一个蜡烛头紧贴在容器底部，再往容器里倒水，蜡烛头并不会浮起来；轻轻地把蜡烛头拨倒，它立刻就会浮起来。

可见，当物体与容器底部紧密接触时，两个接触面间就没有液体渗入，物体的下表面不再受液体对它向上的压强，液体对它就失去了向上托的力，浮力当然随之消失了。

现在，你能提出为潜艇摆脱困境的措施了吗？

“浮力是怎样产生的”，学生对“浮力就是液体对物体向上的压力和向下的压力之差”这一结论是可以理解的，但却难以相信，因此做好浮力消失的实验是攻克这一难点的关键，下面介绍两种简便方法。

[方法1]

器材：大小适当的玻璃漏斗(化学实验室有)一个、乒乓球一只、红水一杯。

步骤：

(1)将乒乓球有意揿入水中，松手后乒乓球很快浮起。

(2)用手托住漏斗(喇叭口朝上，漏斗柄夹在中指和无名指之间)，将乒乓球放入其中，以大拇指按住乒乓球，将水倒入漏斗中，松开拇指，可见乒乓球不浮起，(这时漏斗柄下口有水向下流，这是因为乒乓球与漏斗间不太密合)。

(3)用手指堵住出水口，可见漏斗柄中水面逐渐上升，当水面升至乒乓球时，乒乓球迅即上浮。(若漏斗柄下口出水过快，可在乒乓球与漏斗接触处垫一圈棉花，这样可以从容地观察水在漏斗柄中上升的情况。)

[方法2]

器材：透明平底塑料桶(深度10cm左右，口径宜大些，便于操作)一只、底面基本平整的木块(如象棋子、积木、保温瓶塞等)一个、筷子一根、水一杯。

制作小孔桶：取一铁扦在酒精灯上烧红，在塑料桶底面中央穿一小孔、孔径1cm左右，用砂纸将孔边磨平即成一小孔桶。

步骤：

(1)将木块有意揿入水中，松手后木块很快浮起。

(2)将木块平整的一面朝下放入小孔桶中并遮住小孔，用筷子按住木块，向桶中倒水。移去筷子，可见木块不浮起。(这时小孔处有水向下滴，这是因为木块与桶的接触面之间不很密合)。

(3)用手指堵住小孔，木块立即上浮。

上述两例针对实际中物体的表面不可能绝对平滑这一事实，巧妙地利用“小孔渗漏”使水不在物体下面存留，从而使物体失去液体的向上的压力，也就失去了浮力，结果本应浮在水面上的乒乓球和木块却被牢牢地钉在了水底，不能不令学生叹服。接着步骤(3)又魔术般地使浮力再现，更令学生情绪高涨，跃跃欲试。

学生自己观察问题、解决问题。

第6篇 2023高一生物实验报告大全

实验一 观察dna和rna在细胞中的分布

实验原理：dna 绿色，rna 红色

分布：真核生物dna主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的dna;rna主要分布在细胞质中。

实验结果： 细胞核呈绿色，细胞质呈红色。

实验二 物质鉴定

还原糖+ 斐林试剂 砖红色沉淀

脂 肪 + 苏丹iii 橘黄色

脂 肪 + 苏丹iv红色

蛋白质 + 双缩脲试剂 紫色反应

1、还原糖的检测

(1)材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。

(2)试剂：斐林试剂(甲液：0.1g/ml的naoh溶液，乙液：0.05g/ml的cuso4溶液)，现配现用。

(3)步骤：取样液2ml于试管中→加入刚配的斐林试剂1ml(斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入)→水浴加热2min左右→观察颜色变化(白色→浅蓝色→砖红色)

★模拟尿糖的检测

1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液

2、检测方法：斐林试剂(水浴加热)或班氏试剂或尿糖试纸

3、结果：(用斐林试剂检测)试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。

4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。

2、脂肪的检测

(1)材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。

(2)步骤： 制作切片(切片越薄越好)将最薄的花生切片放在载玻片中央

染色(滴苏丹ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精)

制作装片(滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片)

镜检鉴定(显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒)

3、蛋白质的检测

(1)试剂：双缩脲试剂(a液：0.1g/ml的naoh溶液，b液：0.01g/ml的cuso4溶液)

(2)步骤：试管中加样液2ml→加双缩脲试剂a液1ml，摇匀→加双缩尿试剂b液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色)

考点提示：

(1)常见还原性糖与非还原性糖有哪些?

葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖;淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。

(2)还原性糖植物组织取材条件?

含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。

(3)研磨中为何要加石英砂?不加石英砂对实验有何影响?

加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。

(4)斐林试剂甲、乙两液的使用方法?混合的目的?为何要现混现用?

混合后使用;产生氢氧化铜;氢氧化铜不稳定。

(5)还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为： 浅蓝色 棕色 砖红色

(6)花生种子切片为何要薄? 只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。

(7)转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么?切片的厚薄不均匀。

(8)脂肪鉴定中乙醇作用? 洗去浮色。

(9)双缩脲试剂a、b两液是否混合后用?先加a液的目的。怎样通过对比看颜色变化?

不能混合;先加a液的目的是使溶液呈碱性;先留出一些大豆组织样液做对比。

实验三观察叶绿体和细胞质流动

1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片

2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色，球形或椭球形。

用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色，细胞质接近无色。

知识概要：

取材 制片 低倍观察 高倍观察

考点提示：

(1)为什么可直接取用藓类的小叶，而不能直接取用菠菜叶?

因为藓类的小叶很薄，只有一层细胞组成，而菠菜叶由很多层细胞构成。

(2)取用菠菜叶的下表皮时，为何要稍带些叶肉?

表皮细胞除保卫细胞外，一般不含叶绿体，而叶肉细胞含较多的叶绿体。

(3)怎样加快黑藻细胞质的流动速度?最适温度是多少? 进行光照、提高水温、切伤部分叶片;25℃左右。

(4)对黑藻什么部位的细胞观察，所观察到的细胞质流动的现象最明显? 叶脉附近的细胞。

(5)若视野中某细胞中细胞质的流动方向为顺时针，则在装片中该细胞的细胞质的实际流动方向是怎样的? 仍为顺时针。

(6)是否一般细胞的细胞质不流动，只有黑藻等少数植物的细胞质才流动?

否，活细胞的细胞质都是流动的。

(7)若观察植物根毛细胞细胞质的流动，则对显微镜的视野亮度应如何调节?

视野应适当调暗一些，可用反光镜的平面镜来采光或缩小光圈。

(8)在强光照射下，叶绿体的向光面有何变化?叶绿体的受光面积较小有一面面向光源实验四 观察有丝分裂。

1、材料：洋葱根尖(葱，蒜)

2、步骤：

(一)洋葱根尖的培养

(二)装片的制作

制作流程：解离→漂洗→染色→制片

1.解离： 药液： 质量分数为15%的盐酸，体积分数为95%的酒精(1： 1混合液)。时间：3~5min .目的： 使组织中的细胞相互分离开来。

2.漂洗： 用清水漂洗约10min. 目的： 洗去药液，防止解离过度，并有利于染色。

3.染色： 用质量浓度为0.01g / ml或0.02g / ml的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)染色3~ 5min。目的： 使染色体着色，利于观察。

4.制片： 将根尖放在载玻片上，加一滴清水，并用镊子把根尖弄碎，盖上盖玻片，在盖玻片上再加一片载玻片。 然后用拇指轻轻地按压载玻片。 目的： 使细胞分散开来，有利于观察。

(三)观察

1、先在低倍镜下找到根尖分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂。

2、换高倍镜下观察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂间期。(注意各时期细胞内染色体形态和分布的特点)。其中，处于分裂间期的细胞数目最多。

考点提示：

(1)培养根尖时，为何要经常换水?增加水中的氧气，防止根进行无氧呼吸造成根的腐烂。

(2)培养根尖时，应选用老洋葱还是新洋葱?为什么? 应选用旧洋葱，因为新洋葱尚在休眠，不易生根。

(3)为何每条根只能用根尖?取根尖的时间是何时?为何?

因为根尖分生区的细胞能进行有丝分裂;上午10时到下午2时;因为此时细胞分裂活跃。

(4)解离和压片的目的分别是什么?压片时为何要再加一块载玻片? 解离是为了使细胞相互分离开来，压片是为了使细胞相互分散开来;再加一块载玻片是为了受力均匀，防止盖玻片被压破。

(5)若所观察的组织细胞大多是破碎而不完整的，其原因是什么?压片时用力过大。

(6)解离过程中盐酸的作用是什么?丙酮可代替吗? 分解和溶解细胞间质;不能，而硝酸可代替。

(7)为何要漂洗? 洗去盐酸便于染色。

(8)细胞中染色最深的结构是什么?染色最深的结构是染色质或染色体。

(9)若所观察的细胞各部分全是紫色，其原因是什么?

染液浓度过大或染色时间过长。

(10)为何要找分生区?分生区的特点是什么?能用高倍物镜找分生区吗?为什么?

因为在根尖只有分生区的细胞能够进行细胞分裂;分生区的特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞处于分裂状态;不能用高倍镜找分生区，因为高倍镜所观察的实际范围很小，难以发现分生区。

(11)分生区细胞中，什么时期的细胞最多?为什么? 间期;因为在细胞周期中，间期时间最长。

(12)所观察的细胞能从中期变化到后期吗?为什么?

不能，因为所观察的细胞都是停留在某一时期的死细胞。

(13)观察洋葱表皮细胞能否看到染色体?为什么? 不能，因为洋葱表皮细胞一般不分裂。

(14)若观察时不能看到染色体，其原因是什么?

没有找到分生区细胞;没有找到处于分裂期的细胞;染液过稀;染色时间过短。

实验五比较酶和fe3+的催化效率

考点提示：

(1)为何要选新鲜的肝脏?因为在不新鲜的肝脏中，过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。

(2)该实验中所用试管应选较粗的还是较细的?为什么?应选用较粗的，因为在较细的试管中容易形成大量的气泡，而影响卫生香的复燃。

(3)为何要选动物的肝脏组织来做实验，其他动植物的组织的研磨液能替代吗?因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富;其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶，所以能够替代。

(4)相同质量的块状肝脏和肝脏研磨液，哪一个催化效果好?为什么?研磨液效果好;因为它增加过氧化氢酶与过氧化氢的接触面积。

(5)滴入肝脏研磨液和氯化铁溶液时，可否共用下个吸管?为什么?不可共用，防止过氧化氢酶与氯化铁混合，而影响实验效果。

实验六色素的提取和分离

1、原理：叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂丙酮或无水乙醇——提取色素

各色素在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散速度不同——分离色素

2、步骤：

(1)提取色素 研磨

(2)制备滤纸条

(3)画滤液细线：均匀，直，细，重复若干次

(4)分离色素：不能让滤液细线触及层析液

(5)观察和记录： 结果滤纸条上从上到下依次为：橙黄色(胡萝卜素)、黄色(叶黄素)、蓝绿色(叶绿素a)、黄绿色(叶绿素b)。

考点提示：

(1)对叶片的要求?为何要去掉叶柄和粗的时脉?绿色、是深绿色。因为叶柄和叶脉中所含色素很少。

(2)二氧化硅的作用?不加二氧化硅对实验有何影响?

为了使研磨充分。不加二氧化硅，会使滤液和色素带的颜色变浅。

(3)丙酮的作用?它可用什么来替代?用水能替代吗?

溶解色素。它可用酒精等有机溶剂来代替，但不能用水来代替，因为色素不溶于水。

(4)碳酸钙的作用?不加碳酸钙对实验有何影响?

保护色素，防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。不加碳酸钙，滤液会变成黄绿色或褐色。

(5)研磨为何要迅速?要充分?过滤时为何用布不用滤纸? 研磨迅速，是为了防止丙酮大量挥发;只有充分研磨，才能使大量色素溶解到丙酮中来。色素不能通过滤纸，但能通过尼龙布。

(6)滤纸条为何要剪去两角? 防止两侧层析液扩散过快。

(7)为何不能用钢笔或圆珠笔画线?因为钢笔水或圆珠笔油中含有其它色素，会影响色素的分离结果。

(8) 滤液细线为何要直?为何要重画几次?防止色素带的重叠;增加色素量，使色素带的颜色更深一些。

(9) 滤液细线为何不能触到层析液? 防止色素溶解到层析液中。

(10)滤纸条上色素为何会分离?

由于不同的色素在层析液中的溶解度不同，因而它们随层析液在滤纸条上的扩散速度就不同。

(11)色素带最宽的是什么色素?它在层析液中的溶解度比什么色素大一些?

最宽的色素带是叶绿素a，它的溶解度比叶绿素b大一些。

(12)滤纸条上相互间距的是哪两种色素? 胡萝卜素和叶黄素。

(13)色素带最窄的是第几条色素带?为何?

第一条色素带，因为胡萝卜素在叶绿体的四种色素中含量最少。

实验七观察质壁分离和复原

1、条件：细胞内外溶液浓度差，活细胞，大液泡

2、材料：紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞(具紫色大液泡)，质量浓度0.3g/ml的蔗糖溶液，清水等。

3、步骤：制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片→观察→盖玻片一侧滴蔗糖溶液，另一侧用吸水纸吸引→观察(液泡由大到小，颜色由浅变深，原生质层与细胞壁分离)→盖玻片一侧滴清水， 另一侧用吸水纸吸引→观察(质壁分离复原)

4、结论： 细胞外溶液浓度 > 细胞内溶液浓度，细胞失水 质壁分离

细胞外溶液浓度 < 细胞内溶液浓度，细胞吸水 质壁分离复原

知识概要：制片 观察 加液 观察 加水 观察

考点提示：

(1)洋葱为何要选紫色的?若紫色过淡怎么办?

紫色的洋葱有紫色的大液泡，便于观察液泡的大小变化;缩小光圈，使视野变暗些。

(2)洋葱表皮应撕还是削?为何? 表皮应撕不能削，因为削的表皮往往太厚。

(3)植物细胞为何会出现质壁分离?动物细胞会吗? 当细胞失去水分时，其原生质层的伸缩性大于细胞壁的伸缩性;动物细胞不会发生质壁分离，因为动物细胞没有细胞壁。

(4)质壁分离时，液泡大小和颜色的变化?复原时呢?

细胞发生质壁分离时，液泡变小，紫色加深;当细胞质壁分离复原时，液泡变大，紫色变浅。

(5)若发生质壁分离后的细胞，不能发生质壁分离复原，其原因是什么?

细胞已经死亡(可能是外界溶液浓度过大，细胞失水过多或质壁分离时间过长)

(6)高倍镜使用前，装片如何移动?

若要把视野中上方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向上移动。若要把视野中左方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向左方移动，因为显微镜视野 中看到的是倒像。

(7)换高倍物镜后，怎样使物像清晰?视野明暗度会怎样变化?如何调亮?换高倍物镜后，应调节细准焦螺旋使物像变得清晰;视野会变暗，可调大光圈或改用反光镜的凹面镜来使视野变亮。

(8)所用目镜、物镜的长度与放大倍数的关系? 目镜越长，放大倍数越小;物镜越长，放大倍数越大。

(9)物像清晰后，物镜与载玻片之间的距离和放大倍数的关系?

物镜与载玻片之间的距离越小，放大倍数越大。

(10)总放大倍数的计算方法?放大倍数具体指面积的放大倍数还是长度的放大倍数?

总放大倍数等于目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积;放大倍数是指细小物体长度或宽度的放大倍数。

(11)放大倍数与视野中细胞大小、多少、视野明暗的关系?

放大倍数越大，视野中细胞越大、数目越少、视野越暗。

(12) 更换目镜，若异物消失，则异物在目镜上;更换物镜，若异物消失，则异物在物镜上、移动载玻片，若异物移动，则异物在载玻片上。

(13)怎样利用质壁分离现象来测定植物细胞液的浓度? ①配制一系列浓度从小到大的蔗糖溶液 ②分别用以上不同浓度的溶液制成某植物细胞的临时装片 ③用显微镜观察某植物细胞是否发生质壁分离。某植物细胞液的浓度就介于不能引起质壁分离的浓度和能引起质壁分离的浓度之间。

实验八dna的粗提取与鉴定

考点提示：

(1)鸡血能用猪血代替吗?为什么?不能，因为哺乳动物的红细胞中没有细胞核，不能提取dna.

(2)鸡血中为何要加柠檬酸钠?为何要弃去鸡血细胞的上清液?

防止血液凝固;因为上清液是血浆，不含细胞和dna.

(3)胀破细胞的方法?能用生理盐水吗?

向血细胞中加入蒸馏水，使细胞大量吸水而胀破;不能用生理盐水，因为血细胞在蒸馏水中不能吸收水分。

(4)该实验中应用玻璃烧杯还是塑料烧杯?为什么? 用塑料烧杯，因为玻璃烧杯容易吸附dna.

(5)前后三次过滤时，所用纱布的层数分别是多少?为什么?

第一次用一层纱布，有利于核物质透过纱布进入滤液;第二次用多层纱布，能防止dna丝状物透过纱布进入滤液;第三次用两层纱布，既有利于dna透过纱布，又能防止其它杂质透过纱布。

(6)若实验中所得黏稠物太少，其原因是什么? 第一次加蒸馏水过少，细胞未充分胀破;第二次加蒸馏水过多或过少;第一次过滤用了多层纱布;第二次过滤用了一层纱布。

(7)两次加入蒸馏水的目的分别是什么?

第一次是为了使血细胞吸水胀破;第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于dna有析出。

(8)实验中搅拌溶液时，为何总要沿一个方向搅拌? 防止dna分子受到损伤。

(9)两次析出dna的方法分别是什么?原理分别是什么?

第一次是加蒸馏水，降低氯化钠的浓度，促使dna析出;第二次是加入冷酒精，因为dna不溶于酒精溶液。

(10)三次溶解dna的液体分别是什么?原理分别是什么?

第一次、第二次都是用浓度为2mol/l的氯化钠溶液，第三次用的是0.015mol/l(或2 mol/l)的氯化钠溶液。其原理是dna在氯化钠中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/l时，dna的溶解度最低。2mol/l的氯化钠溶液和0.015mol/l的氯化钠溶液对dna的溶解度都比较高。

(11)鉴定dna时为何要用两支试管?其现象分别是什么?

其中不加dna的试管起对照作用。该试管溶液不变色，另一支加有dna的试管溶液变蓝色。

实验九探究酵母菌的呼吸方式

1、原理： 酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸，产生二氧化碳和水：

c6h12o6+ 6o2 + 6h2o6→co2 + 12h2o + 能量

在无氧条件下进行无氧呼吸，产生酒精和少量二氧化碳：

c6h12o6→2c2h5oh + 2co2 + 少量能量

2、装置：(见课本)

3、检测：(1)检测co2的产生：使澄清石灰水变浑浊，或使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。

(2)检测酒精的产生：橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与酒精发生反应，变成灰绿色。

第7篇 医院微生物实验室安全管理自查报告

医院微生物实验室安全管理自查报告范文

医院微生物实验室安全管理自查报告范文

为加强医院病原微生物实验室生物安全管理工作，确保医院平安目标的实现，我院检验科根据xxxx省《病原微生物实验室生物安全管理条例》的相关内容，对医院实验室安全管理工作进行了自查，对涉及病原微生物菌(毒)种及样本的人员进行了培训，提高他们生物安全的意识，掌握必要的生物安全知识。

一、实验室生物安全管理工作、各项规章制度的运行情况

医院检验科根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》的相关规定进行学习，并定期对有关生物安全各项规章制度的运行情况进行检查，对存在的问题及时进行整改。实验室所从事的实验活动均严格遵守有关的国家标准和实验室技术规范、操作规程，并指定专人监督检查实验室技术规范和操作规程的落实情况。同时，对检查情况进行详细记录，定期召开会议讨论工作中发现的问题，及时纠正。

二、病原微生物菌(毒)种的管理及运输

因各方面条件限制我院现不能开展病原微生物实验室生物的检查，根据通知要求积极组织相关人员主要学习了：病原微生物实验室菌(毒)种的'管理严格登记制度，收到菌(毒)种后立即进行编号登记，详细记录菌(毒)种的名称、来源、特性、用途、批号、传代日期、数量。在菌(毒)种的管理，安全保卫制度，安全保卫措施，保管过程中，传代、分发及使用，均应及时登记，定期核对库存数量。菌(毒)种在进行销毁时，灭菌指示标志，灭菌效果，同时做好销毁登记等内容。

三、实验室生物安全突发事件的处理工作

在此次自检中，我院实验室对以前制订的处置意外事件的应急指挥和处置体系，进一步进行了修订，使之能满足实际工作的需要。

针对当发生自然灾害(如地震、水灾等)或设施出现故障时，我们制定了可能遇到的紧急情况及其处理原则。

同时规范了菌(毒)种外溢在台面、地面和其他表面的的处理原则、皮肤刺伤(破损)的处理原则、离心管发生破裂的处理原则并建立了意外事故报告制度。

在实验室的显著位置张贴了实验负责人、实验室工作人员、消防、医院、公安、工程技术人员、水、电气维修部门电话。

四、提高意识，加强学习

组织检验人员对《病原微生物实验室生物安全管理条例》进行全面系统的学习，同时加强了实验室的准入制度的管理，标明实验室类型、负责人及其联络方式。加强了个人安全防护，并要求检验人员严格遵守标准的操作规程进行检验。

通过这次对微生物实验室生物安全管理工作自查，提高了全体检验人员对微生物实验室生物安全管理工作重要性的认识，加强管理，采取有效措施，确保实验室工作安全。

第8篇 生物实验室工作计划报告

本学期生物实验室将坚持以发展为主题，以教学为中心，以提高教学质量为重点，紧紧围绕学校的整体工作，开拓进取，不断推进实验室工作向前发展。现制定工作计划如下：

1.严格遵守实验室的各项规章制度，做到按章办事。

2.对仪器设备进一步清点，维护，对损坏仪器进行及时维修。

3.做好迎评材料的准备工作，增补完善迎评材料。

4.做好新仪器药品的订购工作，并对新购的仪器及时编号登帐。

5.认真钻研教材，大纲，开齐教材所规定的所有分组实验和演示实验。

6.附实验开出计划

7.第二周：高一使用高倍显微镜观察几种细胞

8.第三周;高一检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质。高二生物体维持ph稳定的机制

9.第六周：观察dna和rna在细胞中的分布。高三实验考查

10.第七周;体验制备细胞膜的方法

11.第九周;用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体

12.第十一周：高一植物细胞的吸水和失水。高二探索生长类似物促进插枝条生根的最适浓度。

13.第十三周:高一比较过氧化氢在不同条件下的分解影响没的活性的条件。高二培养液中酵母菌种群数量的变化。

14.第十五周高一探究酵母细胞的呼吸方式。高二土壤中小动物类群丰富度的研究。

15.第十七周:高一绿叶中色素的提取和分离，环境对光合作用的影响。

16.第十九周高一细胞大小与物质运输的关系，观察根尖分生组织细胞有丝的分裂。高二土壤微生物的分解作用。

第9篇 练习使用显微镜生物实验报告

练习使用显微镜生物实验报告

实验日期： 年月 日

组长： 组员：

一、实验要求

1、练习使用显微镜，学习规范的操作方法。

2、能够独立操作显微镜。

3、能够将玻片标本移动到视野中央，并看到清晰的图像。

二、实验原理

三、材料用具

显微镜，写有“上”字的`玻片，动物、植物玻片标本，擦镜纸，纱布。

四、方法与步骤

（一）取镜和安放

1、右手握住镜臂，左手托住镜座

2、把显微镜放在实验台上，略偏左。安装好目镜和物镜。

（二）对光

3、转动转换器，使低倍物镜对准通光孔（物镜的前端与载物台要保持2厘米的距离）。

4、把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内（右眼睁开，便于以后同时画图）。转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。通过目镜，以看到白亮的视野。

（三）观察

5、把所要观察的玻片标本（也可以用印有“e”字的薄纸片制成）放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。

6、转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（眼睛看着物镜，以免物镜碰到玻片标本）。

7、左眼向目镜内看，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。

注意事项：

1、实验完毕，把显微镜的外表擦拭干净。转动转换器，把两个物镜偏到峡谷旁。最后把显微镜放进镜箱里，

练习使用显微镜生物实验报告

第10篇 生物教学中引导学习教学模式的实验报告模式

生物学是一门实验科学。生物新课程倡导面向全体学生、提高生物科学素养和探究性学习的课程理念。其中探究学习是让学生在主动参与的过程中进行学习，让学生在探究问题的活动中获取知识，了解科学家的工作方法和思维方法，学会科学研究所需要的各种技能，领悟科学观念，培养科学精神。这种学习的方式的中心是针对问题的探究活动，当学生面临各种让他们困惑的问题时，他就要想法寻找答案。在解决问题时，要对问题进行推理、分析，找出问题解决的方向，然后通过观察、实验来收集事实，通过对获得的资料进行归纳、比较、统计分析，形成对问题的解释。最后通过讨论和交流进一步澄清事实，发现新的问题，对问题进行更深入的研究。

在此背景理念依据下，在教学中教学模式也将发生根本的改变，生物课将更多地开展学生的试验、讨论、交流等活动。引导学习教学模式就是在这种背景下构建的。具体的模式结构：问题——阅读、实验——分析、推理、归纳、讨论——结论。

在运用这种模式的过程中我有下面几点感触：

1、在教师的引导下学生可带者问题去阅读、分析、讨论资料，达到解决问题的目的。比如：在学习〈空中飞行的动物〉时，教师可这样引导学生；想一想，我们人要想在天空自由自在的飞翔必须先解决什么问题？学生思考后说；一是，解决了动力问题。二是，解决了地心引力问题。教师随后提出问题：鸟是如何解决这些问题的？引导学生思考，让学生带着问题去看书、阅读、讨论、交流、的出结论。这样既可提高学生的学习兴趣，改变学习方式，又符合新课程的要求。

2、合理开发的有效地利用一切可以利用的课程资源是实现课程目标，转变学生学习方式的关键条件。知识、技能、经验、活动方式方法等都是课程资源。在学习〈水中生活的动物〉时，对于生活在我这些地方的学生来说，对水中的动物了解不多，而且上课时还不能做试验，学生缺少感性的认识，这时教师就要引导学生开发自己已有的课程资源。如：学习鱼鳍的作用时引导学生想想：独桨船和双桨船他们的桨各起什么作用？在学习鱼儿离开水为什么会死？教师可引导学生回忆：头发在水中水什么样的？从水中出来时又是什么样的？这样就很容易理解知识，解决了问题。

3、信息化是当今世界经济和社会发展的大趋势。新课程注重现代信息技术与生物新课程的整合。这样可有效地应用数字化的优势达到学习目标。教师用编制成的演示文稿、多媒体课件来引导学生学习或作为学生自主学习的资源。在课程学习中，利用诸多的文字处理、图形图像处理、信息集成等工具，让学生对课程学习内容进行重组、创作，不仅使学生获得知识，而且能够帮助学生建构知识。但是，教师在制作多媒体课件时，把每个知识点、每个环节设计的过于完美，在教师的引导下学生很简单的就可掌握知识，完成教学任务。但也存在着弊端，这就是学生的自主学习不到位，在获得知识的过程中缺少自主探究的过程。这个问题就是我发现的问题和努力改进的方面。

第11篇 高一生物实验报告大全

高一生物实验报告1-4

实验一观察dna和rna在细胞中的分布

实验原理：dna绿色，rna红色

分布：真核生物dna主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的dna;rna主要分布在细胞质中。

实验结果：细胞核呈绿色，细胞质呈红色。

实验二物质鉴定

还原糖+斐林试剂砖红色沉淀

脂肪+苏丹iii橘黄色

脂肪+苏丹iv红色

蛋白质+双缩脲试剂紫色反应

1、还原糖的检测

(1)材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。

(2)试剂：斐林试剂(甲液：0.1g/ml的naoh溶液，乙液：0.05g/ml的cuso4溶液)，现配现用。

(3)步骤：取样液2ml于试管中→加入刚配的斐林试剂1ml(斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入)→水浴加热2min左右→观察颜色变化(白色→浅蓝色→砖红色)

★模拟尿糖的检测

1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液

2、检测方法：斐林试剂(水浴加热)或班氏试剂或尿糖试纸

3、结果：(用斐林试剂检测)试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。

4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。

2、脂肪的检测

(1)材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。

(2)步骤：制作切片(切片越薄越好)将最薄的花生切片放在载玻片中央

染色(滴苏丹ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精)

制作装片(滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片)

镜检鉴定(显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒)

3、蛋白质的检测

(1)试剂：双缩脲试剂(a液：0.1g/ml的naoh溶液，b液：0.01g/ml的cuso4溶液)

(2)步骤：试管中加样液2ml→加双缩脲试剂a液1ml，摇匀→加双缩尿试剂b液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色)

考点提示：

(1)常见还原性糖与非还原性糖有哪些?

葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖;淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。

(2)还原性糖植物组织取材条件?

含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。

(3)研磨中为何要加石英砂?不加石英砂对实验有何影响?

加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。

(4)斐林试剂甲、乙两液的使用方法?混合的目的?为何要现混现用?

混合后使用;产生氢氧化铜;氢氧化铜不稳定。

(5)还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为：浅蓝色棕色砖红色

(6)花生种子切片为何要薄?只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。

(7)转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么?切片的厚薄不均匀。

(8)脂肪鉴定中乙醇作用?洗去浮色。

(9)双缩脲试剂a、b两液是否混合后用?先加a液的目的。怎样通过对比看颜色变化?

不能混合;先加a液的目的是使溶液呈碱性;先留出一些大豆组织样液做对比。

实验三观察叶绿体和细胞质流动

1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片

2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色，球形或椭球形。

用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色，细胞质接近无色。

知识概要：

取材制片低倍观察高倍观察

考点提示：

(1)为什么可直接取用藓类的小叶，而不能直接取用菠菜叶?

因为藓类的小叶很薄，只有一层细胞组成，而菠菜叶由很多层细胞构成。

(2)取用菠菜叶的下表皮时，为何要稍带些叶肉?

表皮细胞除保卫细胞外，一般不含叶绿体，而叶肉细胞含较多的叶绿体。

(3)怎样加快黑藻细胞质的流动速度?最适温度是多少?进行光照、提高水温、切伤部分叶片;25℃左右。

(4)对黑藻什么部位的细胞观察，所观察到的细胞质流动的现象最明显?叶脉附近的细胞。

(5)若视野中某细胞中细胞质的流动方向为顺时针，则在装片中该细胞的细胞质的实际流动方向是怎样的?仍为顺时针。

(6)是否一般细胞的细胞质不流动，只有黑藻等少数植物的细胞质才流动?

否，活细胞的细胞质都是流动的。

(7)若观察植物根毛细胞细胞质的流动，则对显微镜的视野亮度应如何调节?

视野应适当调暗一些，可用反光镜的平面镜来采光或缩小光圈。

(8)在强光照射下，叶绿体的向光面有何变化?叶绿体的受光面积较小有一面面向光源实验四观察有丝分裂。

1、材料：洋葱根尖(葱，蒜)

2、步骤：

(一)洋葱根尖的培养

(二)装片的制作

制作流程：解离→漂洗→染色→制片

1.解离：药液：质量分数为15%的盐酸，体积分数为95%的酒精(1：1混合液)。时间：3~5min.目的：使组织中的细胞相互分离开来。

2.漂洗：用清水漂洗约10min.目的：洗去药液，防止解离过度，并有利于染色。

3.染色：用质量浓度为0.01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)染色3~5min。目的：使染色体着色，利于观察。

4.制片：将根尖放在载玻片上，加一滴清水，并用镊子把根尖弄碎，盖上盖玻片，在盖玻片上再加一片载玻片。然后用拇指轻轻地按压载玻片。目的：使细胞分散开来，有利于观察。

(三)观察

1、先在低倍镜下找到根尖分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂。

2、换高倍镜下观察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂间期。(注意各时期细胞内染色体形态和分布的特点)。其中，处于分裂间期的细胞数目最多。

考点提示：

(1)培养根尖时，为何要经常换水?增加水中的氧气，防止根进行无氧呼吸造成根的腐烂。

(2)培养根尖时，应选用老洋葱还是新洋葱?为什么?应选用旧洋葱，因为新洋葱尚在休眠，不易生根。

(3)为何每条根只能用根尖?取根尖的时间是何时?为何?

因为根尖分生区的细胞能进行有丝分裂;上午10时到下午2时;因为此时细胞分裂活跃。

(4)解离和压片的目的分别是什么?压片时为何要再加一块载玻片?解离是为了使细胞相互分离开来，压片是为了使细胞相互分散开来;再加一块载玻片是为了受力均匀，防止盖玻片被压破。

(5)若所观察的组织细胞大多是破碎而不完整的，其原因是什么?压片时用力过大。

(6)解离过程中盐酸的作用是什么?丙酮可代替吗?分解和溶解细胞间质;不能，而硝酸可代替。

(7)为何要漂洗?洗去盐酸便于染色。

(8)细胞中染色最深的结构是什么?染色最深的结构是染色质或染色体。

(9)若所观察的细胞各部分全是紫色，其原因是什么?

染液浓度过大或染色时间过长。

(10)为何要找分生区?分生区的特点是什么?能用高倍物镜找分生区吗?为什么?

因为在根尖只有分生区的细胞能够进行细胞分裂;分生区的特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞处于分裂状态;不能用高倍镜找分生区，因为高倍镜所观察的实际范围很小，难以发现分生区。

(11)分生区细胞中，什么时期的细胞最多?为什么?间期;因为在细胞周期中，间期时间最长。

(12)所观察的细胞能从中期变化到后期吗?为什么?

不能，因为所观察的细胞都是停留在某一时期的死细胞。

(13)观察洋葱表皮细胞能否看到染色体?为什么?不能，因为洋葱表皮细胞一般不分裂。

(14)若观察时不能看到染色体，其原因是什么?

没有找到分生区细胞;没有找到处于分裂期的细胞;染液过稀;染色时间过短。

高一生物实验报告5-9

实验五比较酶和fe3+的催化效率

考点提示：

(1)为何要选新鲜的肝脏?因为在不新鲜的肝脏中，过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。

(2)该实验中所用试管应选较粗的还是较细的?为什么?应选用较粗的，因为在较细的试管中容易形成大量的气泡，而影响卫生香的复燃。

(3)为何要选动物的肝脏组织来做实验，其他动植物的组织的研磨液能替代吗?因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富;其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶，所以能够替代。

(4)相同质量的块状肝脏和肝脏研磨液，哪一个催化效果好?为什么?研磨液效果好;因为它增加过氧化氢酶与过氧化氢的接触面积。

(5)滴入肝脏研磨液和氯化铁溶液时，可否共用下个吸管?为什么?不可共用，防止过氧化氢酶与氯化铁混合，而影响实验效果。

实验六色素的提取和分离

1、原理：叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂丙酮或无水乙醇——提取色素

各色素在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散速度不同——分离色素

2、步骤：

(1)提取色素研磨

(2)制备滤纸条

(3)画滤液细线：均匀，直，细，重复若干次

(4)分离色素：不能让滤液细线触及层析液

(5)观察和记录：结果滤纸条上从上到下依次为：橙黄色(胡萝卜素)、黄色(叶黄素)、蓝绿色(叶绿素a)、黄绿色(叶绿素b)。

考点提示：

(1)对叶片的要求?为何要去掉叶柄和粗的时脉?绿色、是深绿色。因为叶柄和叶脉中所含色素很少。

(2)二氧化硅的作用?不加二氧化硅对实验有何影响?

为了使研磨充分。不加二氧化硅，会使滤液和色素带的颜色变浅。

(3)丙酮的作用?它可用什么来替代?用水能替代吗?

溶解色素。它可用酒精等有机溶剂来代替，但不能用水来代替，因为色素不溶于水。

(4)碳酸钙的作用?不加碳酸钙对实验有何影响?

保护色素，防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。不加碳酸钙，滤液会变成黄绿色或褐色。

(5)研磨为何要迅速?要充分?过滤时为何用布不用滤纸?研磨迅速，是为了防止丙酮大量挥发;只有充分研磨，才能使大量色素溶解到丙酮中来。色素不能通过滤纸，但能通过尼龙布。

(6)滤纸条为何要剪去两角?防止两侧层析液扩散过快。

(7)为何不能用钢笔或圆珠笔画线?因为钢笔水或圆珠笔油中含有其它色素，会影响色素的分离结果。

(8)滤液细线为何要直?为何要重画几次?防止色素带的重叠;增加色素量，使色素带的颜色更深一些。

(9)滤液细线为何不能触到层析液?防止色素溶解到层析液中。

(10)滤纸条上色素为何会分离?

由于不同的色素在层析液中的溶解度不同，因而它们随层析液在滤纸条上的扩散速度就不同。

(11)色素带最宽的是什么色素?它在层析液中的溶解度比什么色素大一些?

最宽的色素带是叶绿素a，它的溶解度比叶绿素b大一些。

(12)滤纸条上相互间距的是哪两种色素?胡萝卜素和叶黄素。

(13)色素带最窄的是第几条色素带?为何?

第一条色素带，因为胡萝卜素在叶绿体的四种色素中含量最少。

实验七观察质壁分离和复原

1、条件：细胞内外溶液浓度差，活细胞，大液泡

2、材料：紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞(具紫色大液泡)，质量浓度0.3g/ml的蔗糖溶液，清水等。

3、步骤：制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片→观察→盖玻片一侧滴蔗糖溶液，另一侧用吸水纸吸引→观察(液泡由大到小，颜色由浅变深，原生质层与细胞壁分离)→盖玻片一侧滴清水，另一侧用吸水纸吸引→观察(质壁分离复原)

4、结论：细胞外溶液浓度>细胞内溶液浓度，细胞失水质壁分离

细胞外溶液浓度<细胞内溶液浓度，细胞吸水质壁分离复原

知识概要：制片观察加液观察加水观察

考点提示：

(1)洋葱为何要选紫色的?若紫色过淡怎么办?

紫色的洋葱有紫色的大液泡，便于观察液泡的大小变化;缩小光圈，使视野变暗些。

(2)洋葱表皮应撕还是削?为何?表皮应撕不能削，因为削的表皮往往太厚。

(3)植物细胞为何会出现质壁分离?动物细胞会吗?当细胞失去水分时，其原生质层的伸缩性大于细胞壁的伸缩性;动物细胞不会发生质壁分离，因为动物细胞没有细胞壁。

(4)质壁分离时，液泡大小和颜色的变化?复原时呢?

细胞发生质壁分离时，液泡变小，紫色加深;当细胞质壁分离复原时，液泡变大，紫色变浅。

(5)若发生质壁分离后的细胞，不能发生质壁分离复原，其原因是什么?

细胞已经死亡(可能是外界溶液浓度过大，细胞失水过多或质壁分离时间过长)

(6)高倍镜使用前，装片如何移动?

若要把视野中上方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向上移动。若要把视野中左方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向左方移动，因为显微镜视野中看到的是倒像。

(7)换高倍物镜后，怎样使物像清晰?视野明暗度会怎样变化?如何调亮?换高倍物镜后，应调节细准焦螺旋使物像变得清晰;视野会变暗，可调大光圈或改用反光镜的凹面镜来使视野变亮。

(8)所用目镜、物镜的长度与放大倍数的关系?目镜越长，放大倍数越小;物镜越长，放大倍数越大。

(9)物像清晰后，物镜与载玻片之间的距离和放大倍数的关系?

物镜与载玻片之间的距离越小，放大倍数越大。

(10)总放大倍数的计算方法?放大倍数具体指面积的放大倍数还是长度的放大倍数?

总放大倍数等于目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积;放大倍数是指细小物体长度或宽度的放大倍数。

(11)放大倍数与视野中细胞大小、多少、视野明暗的关系?

放大倍数越大，视野中细胞越大、数目越少、视野越暗。

(12)更换目镜，若异物消失，则异物在目镜上;更换物镜，若异物消失，则异物在物镜上、移动载玻片，若异物移动，则异物在载玻片上。

(13)怎样利用质壁分离现象来测定植物细胞液的浓度?①配制一系列浓度从小到大的蔗糖溶液②分别用以上不同浓度的溶液制成某植物细胞的临时装片③用显微镜观察某植物细胞是否发生质壁分离。某植物细胞液的浓度就介于不能引起质壁分离的浓度和能引起质壁分离的浓度之间。

实验八dna的粗提取与鉴定

考点提示：

(1)鸡血能用猪血代替吗?为什么?不能，因为哺乳动物的红细胞中没有细胞核，不能提取dna.

(2)鸡血中为何要加柠檬酸钠?为何要弃去鸡血细胞的上清液?

防止血液凝固;因为上清液是血浆，不含细胞和dna.

(3)胀破细胞的方法?能用生理盐水吗?

向血细胞中加入蒸馏水，使细胞大量吸水而胀破;不能用生理盐水，因为血细胞在蒸馏水中不能吸收水分。

(4)该实验中应用玻璃烧杯还是塑料烧杯?为什么?用塑料烧杯，因为玻璃烧杯容易吸附dna.

(5)前后三次过滤时，所用纱布的层数分别是多少?为什么?

第一次用一层纱布，有利于核物质透过纱布进入滤液;第二次用多层纱布，能防止dna丝状物透过纱布进入滤液;第三次用两层纱布，既有利于dna透过纱布，又能防止其它杂质透过纱布。

(6)若实验中所得黏稠物太少，其原因是什么?第一次加蒸馏水过少，细胞未充分胀破;第二次加蒸馏水过多或过少;第一次过滤用了多层纱布;第二次过滤用了一层纱布。

(7)两次加入蒸馏水的目的分别是什么?

第一次是为了使血细胞吸水胀破;第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于dna有析出。

(8)实验中搅拌溶液时，为何总要沿一个方向搅拌?防止dna分子受到损伤。

(9)两次析出dna的方法分别是什么?原理分别是什么?

第一次是加蒸馏水，降低氯化钠的浓度，促使dna析出;第二次是加入冷酒精，因为dna不溶于酒精溶液。

(10)三次溶解dna的液体分别是什么?原理分别是什么?

第一次、第二次都是用浓度为2mol/l的氯化钠溶液，第三次用的是0.015mol/l(或2mol/l)的氯化钠溶液。其原理是dna在氯化钠中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/l时，dna的溶解度最低。2mol/l的氯化钠溶液和0.015mol/l的氯化钠溶液对dna的溶解度都比较高。

(11)鉴定dna时为何要用两支试管?其现象分别是什么?

其中不加dna的试管起对照作用。该试管溶液不变色，另一支加有dna的试管溶液变蓝色。

实验九探究酵母菌的呼吸方式

1、原理：酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸，产生二氧化碳和水：

c6h12o6+6o2+6h2o6→co2+12h2o+能量

在无氧条件下进行无氧呼吸，产生酒精和少量二氧化碳：

c6h12o6→2c2h5oh+2co2+少量能量

2、装置：(见课本)

3、检测：(1)检测co2的产生：使澄清石灰水变浑浊，或使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。

(2)检测酒精的产生：橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与酒精发生反应，变成灰绿色。

高一生物易错知识点

1.使能量持续高效的流向对人类最有意义的部分

2.能量在2个营养级上传递效率在10%—20%

3.单向流动逐级递减

4.真菌ph5.0—6.0细菌ph6.5—7.5放线菌ph7.5—8.5

5.物质作为能量的载体使能量沿食物链食物网流动

6.物质可以循环，能量不可以循环

7.河流受污染后，能够通过物理沉降化学分解微生物分解，很快消除污染

8.生态系统的结构：生态系统的成分+食物链食物网

9.淋巴因子的成分是糖蛋白

病毒衣壳的是1—6多肽分子个

原核细胞的细胞壁：肽聚糖

10.过敏：抗体吸附在皮肤，黏膜，血液中的某些细胞表面，再次进入人体后使细胞释放组织胺等物质.

11.生产者所固定的太阳能总量为流入该食物链的总能量

12.效应b细胞没有识别功能

13.萌发时吸水多少看蛋白质多少

大豆油根瘤菌不用氮肥

脱氨基主要在肝脏但也可以在其他细胞内进行

14.水肿：组织液浓度高于血液

15.尿素是有机物，氨基酸完全氧化分解时产生有机物

16.是否需要转氨基是看身体需不需要

17.蓝藻：原核生物，无质粒

酵母菌：真核生物，有质粒

高尔基体合成纤维素等

trna含chonps

18.生物导弹是单克隆抗体是蛋白质

19.淋巴因子：白细胞介素

第12篇 生物学实验报告

关于生物学实验报告

刘希伟201100140041分子生物学实验报告

质粒dna的提取、纯化及检测

姓名：xxx学号：2011001400xx年级：20xx级生物基地班 实验日期：2023年9月16日—30日组别：6组 同组者：xx

一、实验目的

1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒dna的原理和方法。

2、学习并掌握凝胶电泳进行dna的分离纯化的实验原理。

3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。

4、学习并掌握凝胶中dna的分离纯化方法。

二、实验原理

1、质粒dna的制备方法

质粒（plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链dna分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的dna。

质粒dna的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒dna大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒dna。主要方法包括：碱裂解法：0。2molnaoh+1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于质粒大量提取。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒dna的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒dna。

2、质粒dna的提取——碱变性提取法

在细菌细胞中，染色体dna和质粒dna均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶ph值不同。在ph值高达12。0的碱性溶液中，染色体dna的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒dna的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离。因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。当用ph值4。6的kac（naac）高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒dna可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体dna不能复性，而是与不稳定的大分子rna、蛋白质—sds复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒dna分离。溶于上清液的质粒dna，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于dna和rna性质类似，乙醇沉淀

dna的同时，也伴随着rna沉淀，可利用rnasea将rna降解。质粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒dna。

3、凝胶电泳进行dna分离纯化

电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定ph条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化dna的片段，是分子生物学的核心技术之一。

凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中dna的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链dna在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的dna条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。

分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（5—500bp）的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差1bp或质量上相差0。1%的dna都可以彼此分离，这也是采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行dna序列分析的分子基础。虽然它能很快地进行电泳，并能容纳较大的dna上样量，但是与琼脂糖凝胶相比，在制备和操作上繁琐。琼脂糖是从海藻中提取的长链状多聚物，由β—d—吡喃半乳糖与3，6—脱水—l—吡喃半乳糖组成，相对分子质量为104—105。琼脂糖加热至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液体，浇在模版上冷却后形成凝胶，其凝固点为40—45℃。琼脂糖凝胶相对于聚丙烯酰胺凝胶分辨率低，但它的分离范围更大（50至百万bp），小片段dna（50—20000bp）最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定dna的相对分子质量，分离经限制酶水解的dna的片段，进一步纯化dna等。

琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。dna在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于6个因素：样品dna分子的大小、dna分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。

三、实验材料

1、实验仪器

培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、50ml离心管、1。5ml塑料离心管（eppendorf管）、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。

2、实验试剂

lb培养基，抗生素ap（氨苄青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（pci）混合液，预冷无水乙醇，tae电泳缓冲液（10×），上样缓冲液（6×），琼脂糖，溴化乙锭（eb），dna相对分子质量标准物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸钠。

四、实验步骤

1、准备实验

配制lb液体培养基，分装到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固体培养基；准备1000ul、200ul、10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个 ，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。

2、菌体培养

在含有ap的lb平板上挑取一环携带有质粒puc19的e。coli dh5单菌落，接种于20mllb液体培养基中进行37℃振荡过夜培养，培养基中加ap100ul

（100ug/ml），质粒puc19具有ap抗性基因，使得带有puc19的质粒得以生长。 过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mllb液体培养基中，培养基中加入ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。

3、质粒提取

（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。

（2）向离心管中悬滴加入5ml冰预冷的溶液ⅰ打散菌体洗涤，用漩涡振荡器使之充分悬浮后用枪尖吹吸混匀，同步骤（1）离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。

（3）洗涤后每100mg菌体应加入冰预冷的溶液ⅰ1ml，106mg菌体按100mg菌体处理，加入溶液ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混匀，冰浴5min。溶液ⅰ中的葡萄糖使

溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止dna受机械剪切力作用而降解。edta是ca2+和mg2+等二价金属离子的螯合剂，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生长。tris—cl溶液提供适当的ph。

（4） 按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（与溶液ⅰ对应），轻加轻摇，冰浴5min。溶液变清亮透明粘稠如蛋清状。溶液ⅱ中的naoh使细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体dna、质粒dna和蛋白质变性；sds为下一步沉淀做铺垫。

（5）按比例加入冰预冷的溶液ⅲ1。5ml（与溶液ⅰ、ⅱ对应），轻加轻摇，冰浴10min。溶液出现白色絮状沉淀。沉淀为蛋白质sds复合物、细胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因为长时间的碱性条件会打断基因组dna，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被pds共沉淀。同时变性的质粒dna复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。

（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3mnaac混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。 dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph为8左右的溶液中，dna分子是带负电荷的，加一定浓度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna钠盐沉淀。

（7） 以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。

（8）以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。

（9）将dna沉淀溶于1mlte缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个eppendorf管中。te是ph缓冲液，为dna提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有edta是二价阳离子的螯合剂，抑制dna酶作用。

4、质粒纯化

（1）eppendorf管中加入rnase a（纯浓度＞50ug/ml），37℃保温0。5—1h

（2）将上述的溶液平均分配到2个1。5ml的微量离心管中，每管0。5ml，分别加入与溶液等体积的（500ul）tris饱和苯酚溶液，振荡混匀，7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中。苯酚是经tris饱和后的，显黄色。苯

酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。

（3）加入等体积的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响dna的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。

（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中，得上清液400ul。

（5）向上清液中加入1/10体积的naac混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。

（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到dna沉淀，为白色。

（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。

（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulte溶解于1管中。

5、质粒检测

（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×tae电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。

（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×tae 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。

（3）电泳1h，观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。

（4） 把胶槽取出，小心滑出胶块，放进eb溶液中进行染色，完全浸泡约5min。

（5）凝胶成像仪观察。

五、注意事项

（1）滴加溶液ii时，要逐滴加入，且要轻加轻摇溶液使之混匀，整体动作要快，因为强碱在溶液中停留时间不能过长，否则会破坏质粒dna。

（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮状沉淀，溶液iii中和强碱使质粒复性，不可剧烈震荡， 防止染色体dna断裂，应该上下颠倒离心管，使其混匀。